Plasmide CRISPR/Cas9 KO p19 INK4D/CDKN2D (h): sc-401761

Présentation

CDKN2D code pour p19^INK4D, un membre de la famille INK4 des inhibiteurs de kinases dépendantes des cyclines, qui freine de manière sélective l’activité de CDK4/6 afin de maintenir RB1 dans un état hypophosphorylé et de limiter la progression du cycle cellulaire de G1 vers S. En modulant la signalisation cycline D–CDK, p19^INK4D contribue au contrôle des points de contrôle, au rythme de la prolifération et aux programmes de différenciation cellulaire dans de multiples contextes tissulaires. La perturbation de cette voie est fréquemment associée à une entrée dérégulée dans le cycle cellulaire et à des défauts de maintien du génome, pertinents pour la biologie des cancers et d’autres troubles prolifératifs. CDKN2D est donc largement utilisé comme nœud d’étude pour disséquer la régulation de l’axe CDK4/6–RB, les états de type sénescence et le contrôle de la croissance en réponse au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO p19 INK4D/CDKN2D (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDKN2D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDKN2D, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDKN2D à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine p19 INK4D/CDKN2D.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDKN2D pour l'étude de la signalisation de p19 INK4D/CDKN2D, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDKN2D essentiels à la fonction de p19 INK4D/CDKN2D
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDKN2D pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le p19 INK4D/CDKN2D plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le p19 INK4D/CDKN2D plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDKN2D. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le p19 INK4D/CDKN2D plasmide HDR (h) et le p19 INK4D/CDKN2D (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDKN2D pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDKN2D définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.