Plasmide CRISPR/Cas9 KO p130 (m): sc-422615

Présentation

Le gène murin Rbl2 code la protéine de type rétinoblastome p130 (RBL2), une protéine « pocket » qui s’associe à E2F4/5 et aux complexes DREAM pour réprimer la transcription et imposer la sortie du cycle cellulaire. p130 intègre les signaux issus de l’activité des CDK-cyclines et du remodelage, dépendant de la phosphorylation, des complexes de la famille RB afin de réguler la transition G0/G1, la quiescence et les programmes de différenciation. Par ces voies, Rbl2 influence le contrôle des points de contrôle, la répression associée à la chromatine et la stabilité des lignages, ce qui le rend pertinent pour l’étude du contrôle de la prolifération et de la dérégulation oncogénique. Une altération de la voie RB, perturbant la répression d’E2F médiée par p130, est fréquemment examinée dans des modèles de cancer, de sénescence et d’homéostasie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO p130 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rbl2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rbl2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rbl2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine p130.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rbl2 pour l'étude de la signalisation de p130, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rbl2 essentiels à la fonction de p130
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rbl2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le p130 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le p130 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rbl2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le p130 plasmide HDR (m) et le p130 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rbl2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rbl2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.