Partículas Lentivirales de Activación (h) p115: sc-403918-LAC

USO1 codifica p115, un factor de anclaje periférico de membrana con motivo de hélice enrollada (coiled-coil) que coordina el acoplamiento y la fusión de vesículas en la vía secretora temprana. p115 conecta transportadores derivados de COPII con las membranas del Golgi mediante interacciones con GTPasas Rab y golginas, apoyando el tráfico del RE al Golgi, la organización de la cinta del Golgi y el reensamblaje del Golgi durante la mitosis. A través de su función en el tráfico de membranas y la arquitectura de los orgánulos, p115 influye en la proteostasis, la entrega a la superficie de receptores e integrinas y las salidas de señalización vinculadas a la proliferación y la migración. El transporte secretor desregulado y las vías de estrés del Golgi en las que participa p115 se han investigado en contextos como la neurodegeneración, la infección y los cambios asociados al cáncer en la glucosilación y la secreción.

Las partículas de activación lentiviral p115 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de USO1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral p115 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción USO1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de p115. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo USO1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.