Plasmide CRISPR/Cas9 KO P/Q-type Ca++ CP α1A (m): sc-419400
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- P/Q-type Ca++ CP α1A Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique P/Q-type Ca++ CP α1A, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: P/Q-type Ca++ CP α1A Antibody (C-2): sc-390004
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO P/Q-type Ca++ CP α1A (m) | sc-419400 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Cacna1a code la sous-unité α1A formant le pore du canal calcique voltage‑dépendant de type P/Q (CaV2.1), une voie majeure d’entrée de Ca2+ dépendante de l’activité dans les neurones. CaV2.1 couple la dépolarisation membranaire à l’exocytose des vésicules synaptiques, modulant la probabilité de libération des neurotransmetteurs, la plasticité à court terme et l’excitabilité des circuits via des voies de signalisation dépendantes du Ca2+. La fonction du canal est intégrée à celle des protéines présynaptiques de la zone active et des capteurs de Ca2+ en aval qui régulent l’amarrage et la fusion des vésicules. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de CACNA1A/CaV2.1 ont été associées à des phénotypes neurologiques impliquant une transmission synaptique altérée et une instabilité des réseaux, ce qui en fait une cible clé pour des études mécanistiques en neurophysiologie.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO P/Q-type Ca++ CP α1A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cacna1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cacna1a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cacna1a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine P/Q-type Ca++ CP α1A.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cacna1a pour l'étude de la signalisation de P/Q-type Ca++ CP α1A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Cacna1a essentiels à la fonction de P/Q-type Ca++ CP α1A
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cacna1a pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le P/Q-type Ca++ CP α1A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le P/Q-type Ca++ CP α1A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cacna1a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le P/Q-type Ca++ CP α1A plasmide HDR (m) et le P/Q-type Ca++ CP α1A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cacna1a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cacna1a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.