Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ox40L: sc-403518-ACT

TNFSF4 code pour OX40L (CD252), un ligand de la superfamille du TNF exprimé principalement à la surface des cellules présentatrices d’antigène, qui se lie au récepteur OX40 (TNFRSF4) des lymphocytes T activés afin de favoriser la costimulation, la prolifération et la survie. La signalisation OX40L–OX40 amplifie l’activité en aval des voies NF-κB, MAPK et PI3K/AKT, modulant la différenciation des cellules effectrices, la formation de la mémoire et les programmes cytokiniques de l’immunité adaptative. Une expression dérégulée de TNFSF4 a été associée à des microenvironnements immunitaires inflammatoires et à des mécanismes de tolérance altérés, avec des implications pour le risque génétique lié aux maladies auto-immunes et pour la recherche en immunologie tumorale. En tant que ligand membranaire, OX40L contribue également à la communication cellule–cellule au sein des tissus lymphoïdes et des sites inflammatoires, en influençant l’aide aux cellules B et les réponses induites par l’antigène.

Ox40L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNFSF4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ox40L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNFSF4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNFSF4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ox40L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNFSF4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ox40L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ox40L dans les cellules tumorales présentant une expression de TNFSF4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.