Plasmide Double Nickase (h) OTUD2: sc-406672-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) OTUD2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide OTUD2 Double Nickase (h) et le plasmide OTUD2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant YOD1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) OTUD2 | sc-406672-NIC | 20 µg | $410.00 |
YOD1 humain code l’enzyme de déubiquitination OTUD2, une protéase à cystéine du domaine OTU qui modifie les signaux ubiquitine afin de réguler la stabilité des protéines et les sorties de signalisation. OTUD2 participe au contrôle ubiquitine‑dépendant de la protéostasie et des réponses au stress, en s’articulant avec des voies qui gouvernent la dégradation associée au réticulum endoplasmique, la signalisation inflammatoire et le remodelage de l’ubiquitine lié aux dommages de l’ADN. En modulant la cinétique et la spécificité du retrait des chaînes d’ubiquitine, OTUD2 peut influencer des programmes transcriptionnels, la progression du cycle cellulaire et les seuils d’apoptose. La dérégulation des voies de déubiquitination impliquant OTUD2 a été associée à une altération de la signalisation immunitaire et à des phénotypes oncogéniques, ce qui motive des études mécanistiques en biologie tumorale et en inflammation.
OTUD2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus YOD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de YOD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de YOD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de YOD1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.