Plasmide Double Nickase (m) OSX: sc-431270-NIC

Sp7 chez la souris code l’ostérix (OSX), un facteur de transcription à doigts de zinc indispensable à l’engagement et à la maturation de la lignée ostéoblastique en aval des voies de signalisation BMP et Wnt/β-caténine. OSX coordonne des programmes transcriptionnels contrôlant le dépôt de la matrice extracellulaire et la minéralisation, notamment via la régulation de gènes tels que Bglap, Col1a1 et Alpl. Lors du développement osseux et du remodelage, l’activité de Sp7 intègre les signaux issus des progéniteurs ostéogéniques pour déclencher la différenciation, tout en modulant les interactions avec des voies dépendantes de RUNX2. Une dérégulation de Sp7/OSX est associée à une ossification déficiente et à des phénotypes squelettiques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie osseuse, de la réparation des fractures et des troubles liés à l’ostéogenèse.

OSX Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sp7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sp7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sp7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sp7.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.