osteopontin/OPN/SPP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400219-ACT

SPP1 codifica a osteopontina (OPN), uma fosfoglicoproteína secretada que atua como uma citocina associada à matriz extracelular, influenciando a adesão, a migração e a sobrevivência celular por meio da interação com integrinas e com o receptor CD44. A OPN regula a sinalização inflamatória e a remodelação tecidual ao coordenar a quimiotaxia de leucócitos, a polarização de macrófagos e a atividade de osteoclastos, além de integrar sinais de adesão focal e da dinâmica do citoesqueleto para moldar as interações célula–matriz. A expressão de SPP1 é frequentemente alterada em contextos de inflamação crônica, fibrose, remodelação cardiovascular e comunicação cruzada no microambiente tumoral–imunológico, onde pode modular invasão, angiogênese e recrutamento de células imunes. Essas propriedades tornam o SPP1 um alvo útil para estudar sinalização extracelular, regulação imune e fenótipos dependentes da matriz em modelos celulares humanos.

osteopontin/OPN/SPP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SPP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

osteopontin/OPN/SPP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SPP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SPP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de osteopontin/OPN/SPP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SPP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de osteopontin/OPN/SPP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via osteopontin/OPN/SPP1 em células tumorais com expressão de SPP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.