Particules Lentivirales d'Activation (h) OSR1: sc-406034-LAC

L’OSR1 humain (odd-skipped related transcription factor 1) code un facteur de transcription à doigts de zinc se liant à l’ADN, qui régule des programmes génétiques du développement contrôlant la différenciation mésenchymateuse, l’organogenèse et la mise en place des tissus. L’activité d’OSR1 influence des réseaux transcriptionnels impliqués dans la spécification du destin cellulaire et les interactions épithélio-mésenchymateuses, avec des effets en aval sur l’organisation de la matrice extracellulaire et les voies de signalisation des morphogènes. Une expression altérée d’OSR1 a été associée à des états de différenciation dérégulés et a été étudiée dans des contextes tels que des anomalies congénitales urogénitales et craniofaciales, ainsi que la reprogrammation transcriptionnelle liée au cancer. Ces caractéristiques font d’OSR1 un nœud utile pour explorer les circuits de contrôle des lignages et le fonctionnement des facteurs de transcription dépendant du contexte dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales OSR1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de OSR1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales OSR1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription OSR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de OSR1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif OSR1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.