Plasmide Double Nickase (h) OSCP: sc-404116-NIC

ATP5O code la protéine conférant la sensibilité à l’oligomycine (OSCP), une sous-unité de la tige périphérique de l’ATP synthase mitochondriale (complexe V) qui stabilise l’holoenzyme F1Fo et couple la force proton-motrice à la production d’ATP. OSCP contribue au maintien d’une phosphorylation oxydative efficace, soutenant la bioénergétique cellulaire, le potentiel de membrane mitochondrial et l’homéostasie métabolique. Une perturbation de ATP5O/OSCP peut altérer le fonctionnement de la chaîne de transport des électrons, augmenter les espèces réactives de l’oxygène et déclencher un remodelage métabolique compensatoire. Une activité dérégulée de l’ATP synthase mitochondriale et de l’assemblage du complexe V a été impliquée dans des dysfonctionnements neurométaboliques et dans le métabolisme des cellules cancéreuses, faisant d’ATP5O une cible utile pour étudier la signalisation du stress mitochondrial.

OSCP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATP5O dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATP5O. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATP5O. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATP5O.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.