ORMDL3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403587-ACT

ORMDL3 (orosomucoide-like 3) é uma proteína de membrana do retículo endoplasmático que atua como um regulador-chave da homeostase dos esfingolipídios ao modular a atividade da serina palmitoiltransferase, influenciando assim a produção de ceramidas e a composição lipídica das membranas. Por meio do seu papel no metabolismo lipídico do RE, a ORMDL3 impacta a sinalização de cálcio, as respostas ao estresse do RE e o tônus das vias inflamatórias, conectando a homeostase celular à ativação imune. Variações genéticas e a expressão desregulada de ORMDL3 têm sido associadas à suscetibilidade à asma e a outros fenótipos inflamatórios, reforçando sua relevância para a biologia das vias aéreas e a imunometabolismo. Pesquisadores frequentemente investigam a ORMDL3 para entender como a sinalização impulsionada por lipídios e a proteostase do RE moldam respostas de citocinas, a função epitelial e programas adaptativos ao estresse.

ORMDL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ORMDL3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ORMDL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ORMDL3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ORMDL3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ORMDL3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ORMDL3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ORMDL3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ORMDL3 em células tumorais com expressão de ORMDL3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.