Plasmide CRISPR/Cas9 KO Orexin-A/B (m): sc-420816

Présentation

Le gène murin **Hcrt** code les neuropeptides orexine A et orexine B (hypocrétines), produits par une population restreinte de neurones hypothalamiques et signalant principalement via les RCPG **OX1R** et **OX2R**. La signalisation des orexines favorise l’éveil et le maintien de l’état de veille, intègre l’équilibre énergétique au comportement alimentaire et module les réponses de récompense et de stress par couplage à la mobilisation du Ca²⁺ intracellulaire, à la signalisation MAPK et à des circuits neuroendocriniens plus larges. Ces peptides influencent la sortie autonome et les transitions veille–sommeil en modulant la drive excitatrice au sein des voies monoaminergiques et cholinergiques. Une dysrégulation de la fonction des orexines est fortement associée à une instabilité des états veille–sommeil et à des phénotypes métaboliques, faisant de **Hcrt** un nœud clé pour les études mécanistiques du contrôle des états neuronaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Orexin-A/B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hcrt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hcrt, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hcrt à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Orexin-A/B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hcrt pour l'étude de la signalisation de Orexin-A/B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hcrt essentiels à la fonction de Orexin-A/B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hcrt pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Orexin-A/B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Orexin-A/B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hcrt. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Orexin-A/B plasmide HDR (m) et le Orexin-A/B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hcrt pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hcrt définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.