Plasmide CRISPR d'Activation (m) OPA1: sc-428749-ACT

Le gène murin **Opa1** code la GTPase mitochondriale de type dynamine OPA1, un régulateur central de la fusion de la membrane interne mitochondriale et de l’architecture des crêtes. En contrôlant l’intégrité des jonctions de crêtes, OPA1 contribue à ajuster l’efficacité de la phosphorylation oxydative, le maintien de l’ADN mitochondrial et la compartimentation du cytochrome c, influençant ainsi la sensibilité à l’apoptose intrinsèque. La fonction d’OPA1 est étroitement liée aux voies de contrôle qualité mitochondriales, notamment au clivage protéolytique dépendant d’OMA1/YME1L, qui équilibre les isoformes longues et courtes d’OPA1 en situation de stress. Une activité d’OPA1 altérée est largement utilisée comme point d’entrée mécanistique pour étudier des phénotypes de dysfonction mitochondriale pertinents pour la neurodégénérescence, les neuropathies optiques et les modèles de stress cardiométabolique.

OPA1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Opa1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OPA1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Opa1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Opa1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OPA1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Opa1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OPA1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OPA1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Opa1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.