Plásmido CRISPR de Activación (m) OLIG2: sc-424530-ACT

Olig2 codifica OLIG2, un factor de transcripción de tipo hélice-bucle-hélice básico que orquesta la especificación de linajes neuronales en el sistema nervioso central del ratón en desarrollo y en la edad adulta. OLIG2 se integra con redes reguladoras proneurales y gliales para controlar la proliferación, la migración y las decisiones de destino de los progenitores, con funciones destacadas en la diferenciación de neuronas motoras y oligodendrocitos y en programas génicos asociados a la mielina. Su actividad se interseca con vías de señalización del desarrollo que moldean el patrón neural y el estado de la cromatina, influyendo en programas transcripcionales que definen la identidad regional. La expresión desregulada de OLIG2 y sus programas de linaje se estudian con frecuencia en trastornos del neurodesarrollo, patologías desmielinizantes y la biología de los gliomas como modelos de comportamiento aberrante de progenitores y control del destino glial.

OLIG2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Olig2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OLIG2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Olig2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Olig2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OLIG2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Olig2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OLIG2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OLIG2 en células tumorales con expresión de Olig2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.