Plasmide CRISPR d'Activation (h) OLIG1: sc-402725-ACT

OLIG1 (facteur de transcription 1 des oligodendrocytes) est un facteur de transcription de type hélice-boucle-hélice basique (bHLH) qui régule la spécification de la lignée oligodendrocytaire, la maturation et l’expression des gènes de la myéline dans le système nerveux central humain. Il agit au sein de réseaux transcriptionnels du développement aux côtés de facteurs bHLH apparentés et coopère avec des voies de signalisation qui coordonnent les décisions de destinée des progéniteurs neuraux et la différenciation gliale. Les programmes dépendants d’OLIG1 façonnent la chromatine et les états transcriptionnels, influençant la capacité de remyélinisation et les réponses cellulaires aux lésions. Une activité d’OLIG1 dérégulée ou une différenciation oligodendrocytaire altérée a été impliquée dans des contextes démyélinisants et neurodéveloppementaux, ce qui étaye son utilisation comme cible pour des études mécanistiques de la myélinisation et de la biologie gliale.

OLIG1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de OLIG1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OLIG1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus OLIG1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription OLIG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OLIG1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus OLIG1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OLIG1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OLIG1 dans les cellules tumorales présentant une expression de OLIG1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.