Plasmide CRISPR d'Activation (m) Olfr666: sc-435166-ACT

Olfr666 code un récepteur olfactif murin appartenant à la superfamille des RCPG (récepteurs couplés aux protéines G) de classe A, de type rhodopsine, principalement impliqué dans la détection chimiosensorielle et la transduction des signaux déclenchés par les odorants. Lors de la liaison d’un ligand, les récepteurs olfactifs s’adossent généralement à des cascades de signalisation via protéines G qui augmentent l’AMPc intracellulaire et modulent l’activité des canaux ioniques, influençant l’excitabilité neuronale et le codage sensoriel. Bien que les récepteurs olfactifs soient surtout caractérisés dans l’épithélium olfactif, des membres de cette famille génique sont également rapportés dans certains tissus non olfactifs, ce qui étaye l’existence de rôles plus larges dans la communication cellulaire médiée par les RCPG. Des modifications de l’expression des récepteurs olfactifs et de la dynamique de signalisation des RCPG sont fréquemment utilisées comme paramètres de lecture dans des modèles de dysfonction sensorielle et comme marqueurs moléculaires dans des études du développement neural et de la régulation transcriptionnelle spécifique des tissus.

Olfr666 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Olfr666 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Olfr666 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Olfr666 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Olfr666, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Olfr666. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Olfr666 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Olfr666 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Olfr666 dans les cellules tumorales présentant une expression de Olfr666 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.