Plasmide CRISPR d'Activation (m) Olfr303: sc-434741-ACT

Olfr303 code un récepteur olfactif murin appartenant à la superfamille des GPCR de classe A de type rhodopsine, généralement exprimé dans les neurones sensoriels olfactifs, où il contribue à la détection des odorants et à la transduction du signal. Lors de la liaison au ligand, les récepteurs olfactifs se couplent à des voies médiées par les protéines G qui favorisent la production d’AMPc, l’activité des canaux dépendants des nucléotides cycliques, la dépolarisation membranaire et des programmes transcriptionnels en aval impliqués dans l’activité neuronale et l’adaptation sensorielle. Au-delà de l’olfaction, une expression ectopique des récepteurs olfactifs a été rapportée dans de nombreux tissus, ce qui motive des études sur la régulation, via les GPCR, de la signalisation cellulaire, de la différenciation et de la détection du microenvironnement. Une signalisation GPCR dérégulée est largement pertinente en neurobiologie et en biologie du cancer, faisant d’Olfr303 un modèle utile pour explorer des états de signalisation induits par les récepteurs dans des systèmes murins.

Olfr303 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Olfr303 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Olfr303 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Olfr303 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Olfr303, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Olfr303. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Olfr303 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Olfr303 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Olfr303 dans les cellules tumorales présentant une expression de Olfr303 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.