Plasmide CRISPR d'Activation (m) Olfr291: sc-434560-ACT

Olfr291 code un récepteur olfactif chez la souris, appartenant à la superfamille des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) de classe A, et il est généralement associé aux neurones sensoriels de l’épithélium olfactif. Lors de la liaison du ligand, les récepteurs olfactifs s’adossent à une signalisation via les protéines G qui stimule l’adénylate cyclase, augmente l’AMPc et module l’activité des canaux ioniques dépendants des nucléotides cycliques, influençant ainsi l’excitabilité neuronale et les réponses déclenchées par les odeurs. Au-delà de la biologie sensorielle, une expression ectopique de récepteurs olfactifs a été rapportée pour certains sous-types dans divers tissus, ce qui justifie l’étude de la transduction du signal liée aux RCPG, des programmes transcriptionnels et de la régulation des états cellulaires dans des contextes non canoniques. Olfr291 est donc pertinent pour des études sur le codage chimiosensoriel, la dynamique des voies RCPG et les mécanismes par lesquels des changements d’expression des récepteurs peuvent être associés à des phénotypes cellulaires altérés dans des modèles de maladie.

Olfr291 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Olfr291 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Olfr291 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Olfr291 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Olfr291, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Olfr291. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Olfr291 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Olfr291 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Olfr291 dans les cellules tumorales présentant une expression de Olfr291 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.