Plasmide CRISPR/Cas9 KO OLFML3 (h): sc-404425

Présentation

OLFML3 (olfactomedin-like 3) code une glycoprotéine sécrétée associée à la matrice extracellulaire, appartenant à la famille des olfactomédines, impliquée dans les interactions cellule–matrice et le remodelage tissulaire. Elle est exprimée dans des contextes stromaux et vasculaires et a été associée à la régulation de programmes angiogéniques, de comportements de type fibroblastique et à la modulation de microenvironnements inflammatoires via des effets sur des signaux extracellulaires. L’activité d’OLFML3 s’inscrit à l’intersection de voies contrôlant l’organisation de la matrice extracellulaire, la migration cellulaire et le dialogue endothélio–stromal, des processus fréquemment altérés au cours de la progression tumorale et du remodelage fibrotique. Une expression dérégulée d’OLFML3 a été rapportée dans plusieurs cancers et dans des pathologies associées au compartiment vasculaire, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour l’étude de phénotypes pilotés par le microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OLFML3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène OLFML3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du OLFML3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert OLFML3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OLFML3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en OLFML3 pour l'étude de la signalisation de OLFML3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de OLFML3 essentiels à la fonction de OLFML3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de OLFML3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OLFML3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le OLFML3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus OLFML3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OLFML3 plasmide HDR (h) et le OLFML3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie OLFML3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles OLFML3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.