Plasmide CRISPR/Cas9 KO ODC (h): sc-401055

Présentation

ODC1 code l’ornithine décarboxylase (ODC), l’enzyme limitante de la biosynthèse des polyamines qui convertit l’ornithine en putrescine, permettant la production de spermidine et de spermine nécessaires à la réplication de l’ADN, à l’organisation de la chromatine et à la traduction. L’activité d’ODC est étroitement régulée par une dégradation médiée par l’antizyme et s’intègre au métabolisme des acides aminés, aux signaux de croissance liés à mTOR et à la progression du cycle cellulaire. Un métabolisme des polyamines dérégulé et une expression élevée d’ODC1 sont fréquemment associés à des phénotypes prolifératifs, à l’adaptation métabolique et à des programmes transcriptionnels oncogéniques, faisant d’ODC1 un nœud pertinent pour étudier le contrôle de la croissance et les réponses au stress. La perturbation d’ODC1 éclaire également les recherches sur l’apoptose, la protection contre le stress oxydatif et la signalisation immunitaire ou inflammatoire, où les polyamines modulent l’expression génique et la fitness cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ODC (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ODC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ODC1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ODC1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ODC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ODC1 pour l'étude de la signalisation de ODC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ODC1 essentiels à la fonction de ODC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ODC1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ODC plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ODC plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ODC1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ODC plasmide HDR (h) et le ODC (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ODC1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ODC1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.