Plasmide CRISPR d'Activation (h) OCTN1: sc-403258-ACT

SLC22A4 code le transporteur humain de cations organiques/carnitine OCTN1, un transporteur de solutés polyspécifique qui régule l’entrée et l’efflux cellulaires de petits métabolites cationiques à travers la membrane plasmique. OCTN1 contribue à la gestion des nutriments et à l’homéostasie rédox en transportant des substrats tels que l’ergothionéine et d’autres cations organiques apparentés, ce qui influence la capacité antioxydante intracellulaire et l’adaptation métabolique. Par ces activités de transport, SLC22A4 s’inscrit dans des réseaux de transport membranaire qui façonnent la fonction de barrière épithéliale, la physiologie des cellules immunitaires et le devenir des xénobiotiques. La variation génétique et l’expression altérée de SLC22A4 ont été associées dans la littérature à des phénotypes inflammatoires et auto-immuns, ainsi qu’à des modifications des réponses cellulaires au stress, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques en immunométabolisme et en biologie épithéliale.

OCTN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC22A4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OCTN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC22A4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC22A4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OCTN1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC22A4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OCTN1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OCTN1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC22A4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.