OCT3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402959-ACT

SLC22A3は、有機カチオントランスポーター3（OCT3）をコードしており、OCT3は多基質性の形質膜ソリュートキャリアとして、ナトリウム非依存的に内因性モノアミンおよび多様な外来性の有機カチオンを双方向に輸送します。OCT3はカテコールアミンやその他の生理活性アミンの細胞内取り込みとクリアランスに影響し、脳、心臓、肝臓、胎盤などの組織における神経伝達物質の恒常性、ストレスシグナル伝達、ならびに局所の炎症トーンを形成します。カチオン性代謝産物や薬物への細胞内曝露を制御することにより、OCT3は膜輸送過程、細胞のエネルギー代謝、そして薬物動態の個体差に影響を及ぼします。SLC22A3の発現変化や遺伝的多型は、心代謝系および神経精神系の表現型と関連することが報告されており、モノアミンの取り扱い（ハンドリング）や組織特異的なトランスポーター活性の変化を介して、複雑疾患への感受性を修飾する可能性があります。

OCT3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC22A3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OCT3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC22A3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC22A3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OCT3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC22A3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOCT3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC22A3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOCT3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。