Oct3/4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400012-LAC

POU5F1 codifica il fattore di trascrizione Oct3/4, un regolatore centrale della pluripotenza che mantiene l’autorinnovamento e sopprime l’impegno di linea attraverso un ampio controllo delle reti geniche dello sviluppo. Oct3/4 agisce insieme a partner quali SOX2 e NANOG per plasmare i paesaggi degli enhancer, modulare l’accessibilità della cromatina e coordinare programmi trascrizionali legati all’identità delle cellule staminali. La sua attività interseca vie di segnalazione che influenzano le decisioni di destino cellulare, tra cui TGF-β/SMAD, WNT/β-catenina e PI3K/AKT, contribuendo a bilanciare gli stimoli di proliferazione e differenziamento. Un’espressione deregolata di POU5F1 è associata a stati “stem-like” in oncologia ed è spesso utilizzata come marcatore molecolare negli studi sulla plasticità tumorale, sulla riprogrammazione e sui modelli dello sviluppo umano precoce.

Le particelle di attivazione lentivirale Oct3/4 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di POU5F1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Oct3/4 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione POU5F1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Oct3/4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo POU5F1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.