Plasmide Double Nickase (h) Oct3/4: sc-400012-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Oct3/4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Oct3/4 Double Nickase (h) et le plasmide Oct3/4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant POU5F1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Oct3/4 Antibody (C-10): sc-5279
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Oct3/4 | sc-400012-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Oct3/4 | sc-400012-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **POU5F1** code le facteur de transcription à domaine POU **Oct3/4**, un régulateur central de la pluripotence et de l’auto-renouvellement dans les cellules souches embryonnaires et les cellules souches pluripotentes induites. Oct3/4 agit au sein d’un réseau transcriptionnel interconnecté avec des facteurs tels que **SOX2** et **NANOG** pour contrôler l’engagement de lignée, l’accessibilité de la chromatine et les programmes géniques du développement précoce. Son activité s’articule avec des voies de signalisation qui influencent l’état des cellules souches, notamment **TGF-β/SMAD**, **WNT/β-caténine** et **FGF/ERK**, coordonnant ainsi les signaux de prolifération et de différenciation. Une expression aberrante de **POU5F1** est associée à des programmes transcriptionnels liés au caractère « stemness » dans de nombreux cancers et est largement utilisée comme marqueur de cellules indifférenciées et de l’efficacité de la reprogrammation.
Oct3/4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus POU5F1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de POU5F1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de POU5F1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de POU5F1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.