Plasmide CRISPR d'Activation (h) Oct3/4: sc-410951-ACT

Le gène humain **POU5F1B** code **Oct3/4**, une protéine apparentée aux facteurs de transcription à domaine POU, impliquée dans la régulation des programmes transcriptionnels associés à la pluripotence et de l’état de la chromatine. Les réseaux liés à Oct3/4 recoupent les circuits de « stemness », le remodelage épigénétique et les processus de détermination du destin cellulaire, qui influencent le potentiel de différenciation et les phénotypes d’auto-renouvellement. Une expression dérégulée ou des variations du nombre de copies impliquant **POU5F1B** ont été rapportées dans de multiples contextes tumoraux, où une activité altérée des facteurs OCT peut être associée à la prolifération, à la plasticité de lignée et à une reprogrammation transcriptionnelle. En conséquence, **POU5F1B** est fréquemment étudié dans des modèles de transcription oncogénique, de reprogrammation cellulaire et de régulation des gènes du développement.

Oct3/4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de POU5F1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Oct3/4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus POU5F1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription POU5F1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Oct3/4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus POU5F1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Oct3/4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Oct3/4 dans les cellules tumorales présentant une expression de POU5F1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.