Plasmide CRISPR d'Activation (m) OCT2: sc-422991-ACT

Slc22a2 code le transporteur de cations organiques 2 (OCT2), un transporteur de solutés polyspecifique principalement exprimé dans l’épithélium du tubule proximal rénal, où il assure la captation basolatérale, depuis la circulation, d’amines endogènes et de divers xénobiotiques. OCT2 contribue à la sécrétion rénale en s’associant à des transporteurs d’efflux apicaux et influence la gestion cellulaire des métabolites cationiques, modulant ainsi l’exposition intracellulaire et les réponses au stress dans le tissu rénal. En raison de son rôle central dans les réseaux de transporteurs qui contrôlent la pharmacocinétique et la clairance métabolique, une activité altérée de Slc22a2 est pertinente pour l’étude de la néphrotoxicité, des interactions médicamenteuses et de la variabilité interindividuelle du devenir des composés. Dans les modèles murins, OCT2 est fréquemment étudié afin d’établir des liens entre la fonction des transporteurs et la physiologie rénale, la sensibilité aux toxiques et l’homéostasie systémique des métabolites.

OCT2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Slc22a2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OCT2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Slc22a2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Slc22a2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OCT2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Slc22a2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OCT2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OCT2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Slc22a2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.