Plasmide CRISPR/Cas9 KO OC-3 (h): sc-406357

Présentation

ONECUT3 code le facteur de transcription OC-3, un membre de la famille onecut, caractérisée par un domaine CUT et un domaine homeobox de liaison à l’ADN qui coordonnent des programmes d’expression génique spécifiques des tissus. OC-3 contribue à la régulation de la différenciation cellulaire et de la spécification des lignages en contrôlant des réseaux transcriptionnels qui façonnent les états développementaux et métaboliques. En biologie humaine, les profils d’expression de ONECUT3 ont été associés à la modulation des circuits de régulation génique épithéliaux et hépatiques, ainsi qu’à un contrôle transcriptionnel plus large de voies liées à l’organogenèse. Une activité dérégulée de la famille onecut a été étudiée dans le contexte d’altérations de la différenciation, de la prolifération et de la reprogrammation transcriptionnelle associée aux tumeurs, ce qui appuie son intérêt comme nœud pour des études mécanistiques de réseaux géniques pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OC-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ONECUT3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ONECUT3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ONECUT3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OC-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ONECUT3 pour l'étude de la signalisation de OC-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ONECUT3 essentiels à la fonction de OC-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ONECUT3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OC-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le OC-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ONECUT3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OC-3 plasmide HDR (h) et le OC-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ONECUT3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ONECUT3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.