Plasmide CRISPR/Cas9 KO OC-2 (m): sc-432551

Présentation

Onecut2 (OC-2) est un facteur de transcription homeobox murin qui coordonne la spécification du destin cellulaire et la mise en place des patrons tissulaires au cours du développement, avec des rôles majeurs dans la neurogenèse et la différenciation des organes. En se liant à des éléments régulateurs de l’ADN, OC-2 module des programmes transcriptionnels qui interfèrent avec des réseaux déterminant les lignages et contrôlant la prolifération, la différenciation et l’identité régionale. L’activité de la famille Onecut contribue au maintien de l’identité cellulaire et à la maturation dans de multiples contextes épithéliaux et neuronaux. Une expression dérégulée de ONECUT2 a été associée à des états de différenciation altérés et à des circuits transcriptionnels oncogéniques dans plusieurs types de tumeurs, ce qui appuie son intérêt en tant que nœud mécanistique dans les études de biologie du développement et du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OC-2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Onecut2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Onecut2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Onecut2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OC-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Onecut2 pour l'étude de la signalisation de OC-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Onecut2 essentiels à la fonction de OC-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Onecut2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OC-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le OC-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Onecut2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OC-2 plasmide HDR (m) et le OC-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Onecut2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Onecut2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.