Plasmide Double Nickase (h) Ob: sc-400706-NIC

Le gène humain **LEP** code la leptine (Ob), une adipokine sécrétée qui transmet l’état nutritionnel aux tissus périphériques et au système nerveux central afin de réguler l’appétit, la dépense énergétique et la fonction neuroendocrinienne. La signalisation de la leptine est médiée principalement par des cascades dépendantes de **LEPR** : **JAK2/STAT3**, **PI3K–AKT** et **MAPK**, en interaction avec les voies de l’insuline et de l’inflammation pour coordonner l’homéostasie métabolique. Une expression ou une signalisation de **LEP** dérégulée est associée à des altérations de l’adiposité, de la sensibilité à l’insuline et de la modulation immunitaire, et fait l’objet de nombreuses études dans le contexte des phénotypes cardiométaboliques liés à l’obésité. **LEP/Ob** influence également l’hématopoïèse, la polarisation des lymphocytes T et les réseaux de cytokines, ce qui soutient les recherches sur l’immunométabolisme et l’inflammation systémique.

Ob Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LEP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LEP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LEP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LEP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.