Plasmide CRISPR d'Activation (h) OB-cadherin: sc-401051-ACT

CDH11 code l’OB‑cadhérine, une cadhérine classique qui assure une adhérence cellule–cellule homophilique dépendante du Ca²⁺ et soutient la morphogenèse tissulaire, la cohésion mésenchymateuse et l’organisation du stroma. L’engagement de l’OB‑cadhérine se connecte aux caténines et au cytosquelette d’actine, influençant la stabilité des jonctions, la mécanotransduction et la signalisation dépendante du contact, en interaction avec des voies telles que Wnt/β‑caténine et la dynamique du cytosquelette régulée par les GTPases Rho. En biologie humaine, CDH11 est fortement associé aux programmes de lignée des fibroblastes et des ostéoblastes et contribue au remodelage de la matrice extracellulaire ainsi qu’à des phénotypes migratoires. Une expression dérégulée de CDH11 a été rapportée dans des contextes incluant la fibrose, l’activation stromale liée à l’arthrite et les interactions tumeur–stroma, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la signalisation dépendante de l’adhérence et de la régulation du microenvironnement.

OB-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OB-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OB-cadherin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OB-cadherin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OB-cadherin dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.