OB-cadherin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401051-ACT

CDH11 kodiert OB-Cadherin, ein klassisches Cadherin, das eine Ca²⁺-abhängige homophile Zell-Zell-Adhäsion vermittelt und die Gewebemorphogenese, den mesenchymalen Zusammenhalt sowie die Organisation des Stromas unterstützt. Die Bindung von OB-Cadherin ist mit Cateninen und dem Aktin-Zytoskelett gekoppelt und beeinflusst dadurch die Stabilität von Zellkontakten, die Mechanotransduktion und kontaktabhängige Signalgebung, die sich mit Signalwegen wie Wnt/β-Catenin und der durch Rho-GTPasen regulierten Zytoskelettdynamik überschneidet. In der menschlichen Biologie ist CDH11 besonders mit Differenzierungsprogrammen der Fibroblasten- und Osteoblastenlinie assoziiert und trägt zum Umbau der extrazellulären Matrix sowie zu migratorischen Phänotypen bei. Eine fehlregulierte CDH11-Expression wurde u. a. im Kontext von Fibrose, arthritisassoziierter Stromaktivierung und Tumor-Stroma-Interaktionen beschrieben und ist damit relevant für Studien zur adhäsionsabhängigen Signalübertragung und zur Regulation des Mikromilieus.

OB-cadherin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDH11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OB-cadherin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDH11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDH11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OB-cadherin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDH11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OB-cadherin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OB-cadherin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDH11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.