Plasmide CRISPR/Cas9 KO OATP-H (h): sc-404706

Présentation

SLCO4C1 code le polypeptide humain de transport des anions organiques OATP‑H (OATP4C1), un transporteur de solutés multisubstrats qui assure l’absorption, indépendante du sodium, d’une gamme de métabolites endogènes et d’anions organiques de type xénobiotique à travers les membranes cellulaires. Ce transporteur contribue aux processus de transport transmembranaire qui déterminent l’exposition cellulaire aux composés circulants et influencent ensuite leur devenir métabolique ainsi que les voies de détoxification. Une expression ou une activité modifiée des membres de la famille OATP a été associée à des changements de la distribution tissulaire des substrats et à des perturbations de l’homéostasie métabolique, faisant de SLCO4C1 une cible utile pour l’étude de phénotypes dépendants du transport. En recherche biomédicale, la perturbation de SLCO4C1 permet d’interroger de manière mécanistique les relations transporteur–substrat et leur impact sur la signalisation cellulaire et les réponses au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OATP-H (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLCO4C1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLCO4C1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLCO4C1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OATP-H.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLCO4C1 pour l'étude de la signalisation de OATP-H, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLCO4C1 essentiels à la fonction de OATP-H
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLCO4C1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OATP-H plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le OATP-H plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLCO4C1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OATP-H plasmide HDR (h) et le OATP-H (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLCO4C1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLCO4C1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.