OATP-C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402898-ACT

O SLCO1B1 codifica o polipeptídeo transportador de ânions orgânicos humano OATP-C (OATP1B1), um transportador de captação multiespecífico enriquecido em hepatócitos que medeia o influxo independente de sódio de ácidos biliares, conjugados de bilirrubina, metabólitos de hormônios esteroides, hormônios tireoidianos e diversos xenobióticos. Ao controlar a importação sinusoidal para as células do fígado, o OATP-C influencia a depuração hepática, a recirculação entero-hepática e a exposição sistêmica a metabólitos endógenos e a substratos de pequenas moléculas. A atividade de SLCO1B1 se cruza com vias de desintoxicação e metabólicas coordenadas com enzimas de fase I/II e transportadores de efluxo ABC, moldando a interação transportador–enzima em redes farmacocinéticas. Variações genéticas ou expressão desregulada estão associadas a alterações na disposição de fármacos e à suscetibilidade a reações adversas mediadas por transportadores, e são estudadas no contexto da função hepática, da hiperbilirrubinemia e de mecanismos de interações fármaco–fármaco.

OATP-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLCO1B1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OATP-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLCO1B1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLCO1B1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OATP-C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLCO1B1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OATP-C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OATP-C em células tumorais com expressão de SLCO1B1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.