Plásmido CRISPR de Activación (h) Nup37: sc-409458-ACT

NUP37 codifica Nup37, una subunidad central del complejo Nup107–160, que actúa como andamiaje para el ensamblaje del complejo del poro nuclear (NPC) y sostiene el transporte nucleocitoplasmático selectivo. Al contribuir a la biogénesis y la permeabilidad del NPC, Nup37 influye en el tráfico de ARN y proteínas, la progresión del ciclo celular y programas reguladores del genoma que dependen de una importación/exportación nuclear controlada. La alteración de la expresión o la perturbación de las nucleoporinas se asocia con defectos en la fidelidad mitótica, el control transcripcional y las respuestas al estrés, lo que vincula la disfunción del NPC con fenotipos proliferativos y del desarrollo. Por tanto, NUP37 es relevante para estudiar cómo la arquitectura del transporte nuclear se integra con la regulación de la cromatina y con vías que con frecuencia se desregulan en estados celulares relacionados con el cáncer.

Nup37 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NUP37 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nup37 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NUP37 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NUP37, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nup37. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NUP37 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nup37 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nup37 en células tumorales con expresión de NUP37 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.