Nup107 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405252-ACT

NUP107は、核膜孔複合体（NPC）のNup107–160サブコンプレックスを構成する中核成分であるNup107をコードしており、タンパク質およびRNAの核—細胞質間輸送を支えています。輸送のゲーティング機能にとどまらず、Nup107は核膜の構築、有糸分裂の進行、紡錘体形成にも寄与し、核—細胞質輸送を細胞周期制御やゲノム安定性維持の経路と結び付けています。核膜孔の構造や輸送選択性が乱れると、転写プログラムやストレス応答が再編され得るため、NUP107は核輸送依存的な制御を研究するうえで有用な結節点となります。ヌクレオポリン機能の変化は発生異常やがん関連の細胞状態とも関連付けられており、増殖や核内恒常性に焦点を当てた生物医学研究において機構的な重要性を有します。

Nup107 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NUP107の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nup107 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NUP107 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNUP107転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nup107の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNUP107遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNup107依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNUP107発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNup107経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。