Nup107 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405252-ACT

NUP107 kodiert Nup107, eine Kernkomponente des Nup107–160-Subkomplexes des Kernporenkomplexes, der den nukleozytoplasmatischen Transport von Proteinen und RNAs unterstützt. Über die Transportregulation hinaus trägt Nup107 zur Organisation der Kernhülle, zum Fortschreiten der Mitose und zur Spindelassemblierung bei und verknüpft damit den nukleozytoplasmatischen Transport mit der Zellzyklus-Kontrolle und Signalwegen der Genomstabilität. Störungen der Kernporenarchitektur und der Transportselektivität können Transkriptionsprogramme und Stressantworten umformen, wodurch NUP107 ein nützlicher Knotenpunkt zur Untersuchung kerntransportabhängiger Regulation ist. Veränderte Nukleoporin-Funktion wurde mit Entwicklungsphänotypen und krebsassoziierten zellulären Zuständen in Verbindung gebracht und ist damit mechanistisch relevant für biomedizinische Forschung, die auf Proliferation und nukleäre Homöostase fokussiert.

Nup107 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NUP107-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nup107 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NUP107-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NUP107-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nup107-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NUP107-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nup107-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nup107-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NUP107-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.