Plasmide CRISPR d'Activation (h) NuMA: sc-401570-ACT

Le gène humain **NUMA1** code la protéine de l’appareil mitotique nucléaire (**NuMA**), un grand échafaudage en coiled-coils qui se concentre aux pôles du fuseau pour organiser les extrémités « moins » des microtubules et assurer une ségrégation fidèle des chromosomes pendant la mitose. NuMA coopère avec le complexe dynéine–dynactine et les voies corticales médiées par LGN/Gαi pour positionner le fuseau, maintenir l’intégrité des pôles du fuseau et coordonner la cytocinèse ainsi que l’architecture nucléaire. Une perturbation de la fonction de **NUMA1** peut compromettre la fidélité mitotique, favoriser l’aneuploïdie et modifier les décisions de polarité cellulaire, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude de la stabilité du génome et des phénotypes associés à la prolifération. Ces propriétés relient NuMA à des investigations mécanistiques en biologie du cancer et en biologie cellulaire du développement, où l’orientation du fuseau et la stabilité chromosomique sont centrales.

NuMA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NUMA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NuMA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NUMA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NUMA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NuMA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NUMA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NuMA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NuMA dans les cellules tumorales présentant une expression de NUMA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.