Plasmide CRISPR/Cas9 KO NUDT21 (h): sc-402082

Présentation

NUDT21 code une sous-unité centrale du complexe Cleavage Factor Im (CFIm), qui reconnaît des motifs UGUA et favorise la maturation de l’extrémité 3′ ainsi que la polyadénylation des pré-ARNm. En influençant le choix de sites alternatifs de polyadénylation, NUDT21 contribue à contrôler la longueur des UTR 3′, la stabilité des ARNm et l’efficacité de traduction, modulant ainsi des programmes d’expression génique liés à la prolifération, à la différenciation et aux réponses au stress. Une activité altérée de NUDT21 est associée à des changements étendus de polyadénylation alternative, susceptibles de remodeler les réseaux régulateurs, notamment le contrôle médié par les microARN et les interactions avec des protéines liant l’ARN. La dérégulation de ces voies de maturation de l’ARN a été impliquée dans divers contextes pertinents pour les maladies, dont le remodelage du transcriptome associé au cancer et des phénotypes neurodéveloppementaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NUDT21 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NUDT21 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NUDT21, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NUDT21 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NUDT21.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NUDT21 pour l'étude de la signalisation de NUDT21, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NUDT21 essentiels à la fonction de NUDT21
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NUDT21 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NUDT21 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NUDT21 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NUDT21. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NUDT21 plasmide HDR (h) et le NUDT21 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NUDT21 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NUDT21 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.