NUDT21 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402082-ACT

Il gene umano **NUDT21** codifica un componente centrale del complesso **cleavage factor Im (CFIm)**, che riconosce elementi **UGUA** sul pre‑mRNA e promuove la maturazione dell’estremità **3′** e la scelta del sito di poliadenilazione (**poly(A)**). Regolando la poliadenilazione alternativa, NUDT21 modella la lunghezza della **3′ UTR**, la stabilità dei trascritti, la loro localizzazione e il controllo della traduzione, influenzando così programmi globali di espressione genica. Questo ruolo nel processamento dell’RNA collega NUDT21 a vie che governano il controllo del ciclo cellulare, la differenziazione e le risposte allo stress, attraverso una modulazione coordinata dell’uso delle isoforme di mRNA. Un’attività CFIm deregolata e pattern alterati di poliadenilazione alternativa che coinvolgono NUDT21 sono stati associati a rimodellamenti trascrizionali rilevanti per la malattia nel cancro e a fenotipi neuroevolutivi, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della regolazione post‑trascrizionale.

NUDT21 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NUDT21 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NUDT21 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NUDT21 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NUDT21, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NUDT21. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NUDT21 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NUDT21 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NUDT21 nelle cellule tumorali con espressione di NUDT21 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.