Plasmide CRISPR d'Activation (h) NUDT21: sc-402082-ACT

NUDT21 humain code un composant central du complexe cleavage factor Im (CFIm), qui reconnaît les éléments UGUA sur le pré-ARNm et favorise la maturation de l’extrémité 3′ ainsi que le choix du site de poly(A). En régulant la polyadénylation alternative, NUDT21 module la longueur de la région 3′ UTR, la stabilité des transcrits, leur localisation et le contrôle de la traduction, influençant ainsi des programmes globaux d’expression génique. Ce rôle dans le traitement de l’ARN relie NUDT21 à des voies impliquées dans le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation et les réponses au stress via une modulation coordonnée de l’utilisation des isoformes d’ARNm. Une activité CFIm dérégulée et des profils altérés de polyadénylation alternative impliquant NUDT21 ont été associés à des remaniements transcriptionnels pertinents pour la maladie dans le cancer et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la régulation post‑transcriptionnelle.

NUDT21 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NUDT21 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NUDT21 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NUDT21 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NUDT21, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NUDT21. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NUDT21 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NUDT21 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NUDT21 dans les cellules tumorales présentant une expression de NUDT21 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.