Plasmide Double Nickase (h) NTR3: sc-402905-NIC

SORT1 code la sortiline (NTR3), un récepteur membranaire de type I multifonctionnel qui coordonne le trafic intracellulaire des protéines et le tri endosomal–lysosomal via des interactions avec le complexe rétromer et des protéines adaptatrices. Dans les neurones et d’autres types cellulaires, NTR3 agit comme corécepteur des pronéurotrophines et module la signalisation via les récepteurs des neurotrophines, influençant la croissance des neurites, l’activité synaptique et les voies de survie cellulaire. Au-delà de la biologie du système nerveux, la sortiline régule la prise en charge et la sécrétion des lipoprotéines, ce qui la relie au métabolisme lipidique et aux processus inflammatoires. Une expression ou un trafic de SORT1 dérégulés ont été associés à des traits cardiométaboliques, à des mécanismes neurodégénératifs et à une altération de la protéostasie cellulaire, ce qui en fait une cible utile pour des études axées sur les voies biologiques.

NTR3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SORT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SORT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SORT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SORT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.