Plasmide CRISPR/Cas9 KO NTR2 (h): sc-405783

Présentation

Le récepteur 2 de la neurotensine (NTSR2, NTR2) est un récepteur couplé aux protéines G de classe A qui se lie au neuropeptide neurotensine et se couple principalement à Gαq/11 pour stimuler la signalisation de la phospholipase C, la mobilisation du calcium intracellulaire et des cascades de kinases en aval telles que PKC–MAPK/ERK. La signalisation de NTR2 influence l’excitabilité neuronale, la transmission synaptique et les réponses neuroendocriniennes, et elle peut moduler des interactions avec les voies dopaminergiques et glutamatergiques qui façonnent l’activité des circuits neuronaux. Dans des contextes non neuronaux, l’expression de NTSR2 a été associée à la signalisation inflammatoire et aux réponses au stress cellulaire, ce qui soutient sa pertinence pour l’étude de la neuroinflammation et du remodelage tissulaire. Une activité dérégulée de l’axe neurotensine–NTR2 a été examinée dans la biologie des maladies neurologiques et neuropsychiatriques, ainsi que dans des mécanismes contribuant à des altérations de la prolifération et de la survie cellulaires dans des modèles associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NTR2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NTSR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NTSR2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NTSR2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NTR2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NTSR2 pour l'étude de la signalisation de NTR2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NTSR2 essentiels à la fonction de NTR2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NTSR2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NTR2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NTR2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NTSR2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NTR2 plasmide HDR (h) et le NTR2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NTSR2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NTSR2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.