Plasmide Double Nickase (h) NTR1: sc-402552-NIC

NTSR1 code le récepteur 1 de la neurotensine (NTR1), un RCPG de classe A qui se lie au neuropeptide neurotensine afin de réguler la signalisation intracellulaire via la mobilisation de Ca²⁺ induite par Gαq/PLCβ et l’activation de la PKC, avec un couplage additionnel aux voies MAPK/ERK et au trafic médié par la β-arrestine. NTR1 influence la neurotransmission, la contraction du muscle lisse et les processus sécrétoires via la désensibilisation du récepteur, son internalisation et le « cross-talk » avec d’autres voies de RCPG. Des altérations de l’expression et de la signalisation de NTSR1 ont été associées à un dérèglement de programmes prolifératifs et inflammatoires dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la dynamique de signalisation des RCPG. En tant que récepteur membranaire présentant une endocytose rapide induite par le ligand, NTR1 est également largement utilisé pour étudier la pharmacologie des récepteurs, la signalisation compartimentée et les réponses transcriptionnelles en aval.

NTR1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NTSR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NTSR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NTSR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NTSR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.