Plasmide Double Nickase (m) NSUN4: sc-428269-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) NSUN4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide NSUN4 Double Nickase (m) et le plasmide NSUN4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Nsun4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) NSUN4 | sc-428269-NIC | 20 µg | $410.00 |
Nsun4 code pour NSUN4, une méthyltransférase mitochondriale de l’ARN (cytosine-5) qui méthyle l’ARNr mitochondrial et soutient la biogenèse et la traduction des ribosomes mitochondriaux. En coordination avec la machinerie mitochondriale de transcription et de traduction, NSUN4 contribue au maintien de la capacité de phosphorylation oxydative et du fonctionnement de la chaîne respiratoire, ce qui l’associe au métabolisme énergétique cellulaire et au contrôle qualité des mitochondries. On s’attend à ce qu’une perturbation de l’activité de NSUN4 modifie la synthèse des protéines mitochondriales ainsi que les voies de signalisation bioénergétiques qui influencent les réponses au stress et les décisions de destinée cellulaire. Par conséquent, Nsun4 est fréquemment étudié dans des contextes où la dysfonction mitochondriale contribue à des phénotypes pertinents pour la maladie, notamment la neurodégénérescence, les déséquilibres cardiométaboliques et les anomalies du développement.
NSUN4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Nsun4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Nsun4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Nsun4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Nsun4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.