Plasmide CRISPR/Cas9 KO NSP3 (h): sc-407380

Présentation

SH2D3C code NSP3, une protéine adaptatrice cytosolique contenant des domaines SH2 et SH3, qui contribue à relier des récepteurs phosphorylés sur des résidus tyrosine à des complexes de signalisation en aval. NSP3 participe à des voies impliquées dans le remodelage du cytosquelette, l’adhésion dépendante des intégrines et la transduction du signal médiée par les récepteurs, influençant la migration cellulaire et des comportements cellulaires liés à l’immunité. Par ses interactions avec des kinases et des protéines échafaudages, elle peut moduler la voie MAPK et d’autres réseaux dépendants de la phosphotyrosine, qui déterminent les seuils d’activation et les programmes de motilité cellulaire. Une signalisation adaptatrice dérégulée ainsi que des phénotypes d’adhésion/migration altérés sont fréquemment impliqués dans l’inflammation et des processus associés au cancer, ce qui fait de SH2D3C une cible utile pour des études mécanistiques des circuits de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NSP3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SH2D3C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SH2D3C, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SH2D3C à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NSP3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SH2D3C pour l'étude de la signalisation de NSP3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SH2D3C essentiels à la fonction de NSP3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SH2D3C pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NSP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NSP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SH2D3C. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NSP3 plasmide HDR (h) et le NSP3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SH2D3C pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SH2D3C définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.