Plásmido CRISPR de Activación (h) NSFL1C p47: sc-402328-ACT

NSFL1C (p47) codifica una proteína adaptadora que se une a la ATPasa AAA+ VCP/p97 y ayuda a dirigirla hacia sustratos específicos en el control de calidad proteico dependiente de ubiquitina. NSFL1C p47 participa en el tráfico de membranas y en la dinámica del Golgi y del retículo endoplásmico (RE), incluidos eventos de remodelación mediados por p97 y sus cofactores que influyen en la fusión de vesículas y el reensamblaje de orgánulos. A través de su papel en la proteostasis y en vías de degradación sensibles al estrés, como la degradación asociada al RE (ERAD), una función alterada de p47 puede modular la sensibilidad celular al estrés proteotóxico y la remodelación de los compartimentos secretores. La desregulación del eje p97–cofactor se ha relacionado con la neurodegeneración y con dependencias de proteostasis asociadas al cáncer, lo que convierte a NSFL1C en un nodo útil para estudios mecanísticos de estos procesos.

NSFL1C p47 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NSFL1C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NSFL1C p47 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NSFL1C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NSFL1C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NSFL1C p47. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NSFL1C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NSFL1C p47 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NSFL1C p47 en células tumorales con expresión de NSFL1C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.