Particules Lentivirales d'Activation (h) NRSF: sc-418578-LAC

Le facteur de transcription silencieux RE1 (REST), également appelé facteur de silencement restrictif des neurones (NRSF), est un répresseur transcriptionnel spécifique de séquence qui se lie aux éléments RE1/NRSE afin de restreindre les programmes géniques neuronaux dans les cellules non neuronales et de façonner la maturation et la plasticité neuronales. REST coordonne le remodelage de la chromatine en recrutant des complexes co-répresseurs tels que CoREST, des HDAC et des méthyltransférases d’histones, influençant ainsi l’état épigénétique, la signalisation synaptique et les réseaux transcriptionnels dépendants de l’activité. Par ces fonctions, REST intègre des signaux développementaux et des réponses au stress qui affectent les décisions de destin cellulaire, l’excitabilité et les trajectoires de différenciation. Une activité REST/NRSF dérégulée a été impliquée dans des processus neurodéveloppementaux et neurodégénératifs ainsi que dans un reprogrammation transcriptionnelle oncogénique, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques de la régulation génique.

Les particules d'activation lentivirales NRSF (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de REST dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NRSF (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription REST, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NRSF. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif REST ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.