Plasmide Double Nickase (h) NRSF: sc-418578-NIC

REST, également connu sous le nom de facteur silencieux restrictif des neurones (NRSF), est un répresseur transcriptionnel à doigts de zinc qui se fixe sur des sites de l’élément répresseur-1 (RE1/NRSE) afin de réduire au silence les programmes géniques neuronaux dans les cellules non neuronales et de moduler la maturation neuronale. En recrutant des complexes corépresseurs tels que SIN3/HDAC et CoREST/LSD1, REST remodèle la chromatine pour réguler des gènes synaptiques, des canaux ioniques et des voies neurosécrétoires, influençant la différenciation, l’excitabilité et les réponses au stress. Le contrôle transcriptionnel dépendant de REST s’articule avec la régulation épigénétique et la signalisation dépendante de l’activité, contribuant à des modifications spécifiques au contexte de l’identité cellulaire et de la plasticité. Une activité REST/NRSF dérégulée a été associée à des mécanismes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi qu’à des programmes aberrants de répression transcriptionnelle observés dans plusieurs contextes tumoraux, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude des réseaux de régulation génique.

NRSF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus REST dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de REST. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de REST. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de REST.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.