Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nrl: sc-402610-ACT

NRL (neural retina leucine zipper) code le facteur de transcription Nrl, un régulateur de type « basic leucine zipper » (bZIP) qui joue un rôle central dans le développement des photorécepteurs et l’établissement de l’identité des cellules en bâtonnets. En se liant à des éléments cis‑régulateurs et en coordonnant des réseaux transcriptionnels avec d’autres facteurs rétiniens, Nrl contrôle des programmes impliqués dans la phototransduction, la formation du segment externe et l’homéostasie métabolique des neurones différenciés. La dérégulation de l’expression des gènes associés à NRL est liée à des maladies rétiniennes héréditaires et à une altération de la fonction des photorécepteurs, ce qui fait de NRL un nœud pertinent pour étudier les circuits de régulation génique en biologie rétinienne. L’activité de Nrl chez l’humain est donc pertinente pour les recherches sur la différenciation neuronale, la spécification du destin cellulaire et le contrôle transcriptionnel dans la rétine.

Nrl Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NRL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nrl Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NRL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NRL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nrl. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NRL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nrl au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nrl dans les cellules tumorales présentant une expression de NRL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.