Plasmide Double Nickase (m) Nrf2: sc-421869-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Nrf2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Nrf2 Double Nickase (m) et le plasmide Nrf2 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Nfe2l2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Nrf2 | sc-421869-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Nrf2 | sc-421869-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Chez la souris, Nfe2l2 code Nrf2, un facteur de transcription bZIP qui coordonne la défense cellulaire contre le stress électrophile et oxydatif en se liant aux éléments de réponse antioxydante (ARE) et en induisant des gènes de détoxification, de régulation redox et de protéostase. En conditions basales, l’activité de Nrf2 est limitée par l’ubiquitination dépendante de KEAP1 et sa dégradation par le protéasome, tandis que les signaux de stress stabilisent Nrf2 et remanient les programmes transcriptionnels touchant le métabolisme du glutathion, la régénération du NADPH et les voies d’élimination des xénobiotiques. La signalisation Nrf2 s’entrecroise avec des réseaux inflammatoires et métaboliques, notamment via un dialogue avec NF-κB et l’homéostasie mitochondriale, façonnant des réponses adaptatives aux stresseurs environnementaux et endogènes. Un dérèglement de l’axe KEAP1–Nrf2 est impliqué dans des modèles de carcinogenèse, d’états inflammatoires chroniques, de neurodégénérescence et de dysfonctionnement métabolique, ce qui fait de Nfe2l2 une cible fréquente pour les études mécanistiques de la résilience au stress et de la biologie redox.
Nrf2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Nfe2l2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Nfe2l2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Nfe2l2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Nfe2l2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.