Plasmide Double Nickase (h) Nrf2: sc-400017-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Nrf2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Nrf2 Double Nickase (h) et le plasmide Nrf2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NFE2L2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Nrf2 Antibody (H-6): sc-518033
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Nrf2 | sc-400017-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Nrf2 | sc-400017-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFE2L2 code le facteur nucléaire 2 apparenté au facteur érythroïde 2 (Nrf2), un facteur de transcription de type basic leucine zipper qui coordonne les défenses cellulaires contre le stress oxydatif et électrophile. Une fois stabilisé et transloqué dans le noyau, Nrf2 se fixe aux éléments de réponse antioxydante (ARE) afin d’induire l’expression de gènes impliqués dans la synthèse du glutathion, la détoxification des xénobiotiques, la régénération du NADPH et la protéostasie, intégrant ainsi le contrôle redox au métabolisme et à la signalisation inflammatoire. Cette voie croise l’ubiquitination dépendante de KEAP1, la signalisation MAPK et la régulation de l’autophagie, modulant les réponses au dysfonctionnement mitochondrial et aux toxiques environnementaux. Une activité de Nrf2 dérégulée a été associée à une tolérance au stress altérée et à une reprogrammation métabolique dans divers contextes pertinents pour les maladies, notamment la carcinogenèse, la neurodégénérescence et les états inflammatoires chroniques.
Nrf2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NFE2L2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NFE2L2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NFE2L2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NFE2L2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.