Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nrf2: sc-400017-ACT

NFE2L2 code pour le facteur de transcription humain Nrf2, un régulateur central de l’homéostasie redox cellulaire et de la détoxification des composés électrophiles. En situation de stress oxydatif ou xénobiotique, Nrf2 s’accumule et se fixe sur les éléments de réponse antioxydante (ARE) afin d’induire l’expression de gènes impliqués dans la synthèse du glutathion, la régénération du NADPH, le métabolisme de l’hème et la protéostasie, en intégrant des signaux issus de l’axe ubiquitine KEAP1–CUL3 et de voies associées aux MAPK/PI3K. Ce programme module le niveau d’inflammation et l’adaptation métabolique, et une activité altérée de Nrf2 est impliquée dans des affections caractérisées par un stress oxydatif chronique, notamment la neurodégénérescence, les dysfonctions cardiométaboliques et la biologie tumorale.

Nrf2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NFE2L2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nrf2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NFE2L2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NFE2L2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nrf2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NFE2L2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nrf2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nrf2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NFE2L2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.