Plasmide CRISPR d'Activation (h) NRAMP 1: sc-402423-ACT

SLC11A1 code NRAMP1 (natural resistance–associated macrophage protein 1), un transporteur d’ions métalliques divalents principalement associé aux membranes des phagosomes dans les cellules myéloïdes. En régulant la disponibilité intraphagosomale de Fe²⁺ et de Mn²⁺, NRAMP1 influence les réponses antimicrobiennes dépendantes des métaux, la gestion du stress oxydatif et la maturation des phagolysosomes. Cette activité s’articule avec la signalisation de l’immunité innée et les voies de traitement des antigènes, qui façonnent les états d’activation des macrophages et les réponses inflammatoires. Les variations génétiques ou une expression altérée de SLC11A1 ont été associées à une susceptibilité différente à des phénotypes infectieux et inflammatoires, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques en immunométabolisme et en biologie hôte–pathogène.

NRAMP 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC11A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NRAMP 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC11A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC11A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NRAMP 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC11A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NRAMP 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NRAMP 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC11A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.